ESB - Dissertações de Mestrado / Master Dissertations
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- Listeria monocytogenes, cows raw milk, mastitis and food safetyPublication . Ferreira, Jorge Manuel Pinto; Teixeira, Paula; Silva, JoanaThis thesis intends to initially make an overview of the food safety area, and then a review of the main topics about L. monocytogenes, particularly its relationship with milk and the dairy industry, and report the laboratory work done in the scope of a Master of Science (MS) project. The principal aim of the work was the evaluation of the occurrence of L. monocytogenes in cows raw milk, in the Northern Portuguese Coast region. The detection (with VIDAS methodology) and enumeration (direct and according with the Most Probable Number (MPN) technique) of L. monocytogenes was performed in a total of 166 raw milk samples (45 from healthy cows, 58 from cows presenting sub-clinical mastitis, 27 from cows presenting clinical mastitis, and 36 were bulk tank samples), from 39 different dairy farms, from 13 different localities. L. monocytogenes was detected in two of these samples: one from a bulk tank, and the other from a clinical mastitis, both from the same dairy farm. From this dairy, environmental samples, as well as a sample of silage, unifeed, cattle manure and water were also analysed, for detection and enumeration of L. monocytogenes. To our knowledge, this was the first time L. monocytogenes was isolated from a clinical mastitis cow milk in Portugal. Twenty two L. monocytogenes isolates (from the refered milk samples) were identified, and further characterized by multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR), antibiotic susceptibility and resistance to arsenic, cadmium and tetracycline. These subtyping techniques had results similar for all the isolates (with the exception of gentamicin Minimum Inhibitory Concentration (MIC)) suggesting that all the isolates belong to the same clone, particularly adapted to the environment of that farm, and that the origin of bulk tank contamination, was an infected cow, excreting L. monocytogenes through the udder. Additional studies using more discriminatory techniques such as pulse field gel electrophoresis (PFGE), however, are needed in order to confirm this hypothesis.
- The antimicrobial effect of red wine on Bacillus cereus in simulated gastrointestinal conditionsPublication . Vaz, Miguel José Santos; Couto, José António Gomes; Hogg, Timothy AlunDiversos estudos têm vindo a descrever uma panóplia de efeitos benéficos na saúde humana, potencialmente atribuíveis ao consumo de vinho, incluindo efeito anti-oxidante, anti-carcinogénico, anti-inflamatório, anti-cardiovascular, assim como propriedades antimicrobianas. Este estudo foi conduzido com o objectivo de avaliar a actividade antimicrobiana do vinho sobre Bacillus cereus, células vegetativas e esporos. Os resultados apresentados neste trabalho indicam claramente, via testes in vitro, que o vinho inactiva com eficácia as células vegetativas das duas estirpes de B. cereus utilizadas. O vinho tinto inactivou as células vegetativas em fase estacionária, atingindo-se números de colónias não detectáveis (< 500 CFU mL-1), em menos de 10 s de exposição. Como tal, os ensaios de inactivação subsequentes foram efectuados com vinho diluído com água (diluição de 1:4 e 1:8). O vinho diluído 1:4 causou uma redução de 4.5 ciclos logarítmicos nas contagens de células viáveis, em 20 s de ensaio. No entanto, os esporos de B. cereus apresentaram uma elevada resistência à exposição directa ao vinho, com reduções nas contagens inferiores a 1.0 ciclo logarítmico, em 3 h. A influência de componentes do vinho (etanol, ácidos orgânicos, baixo pH e compostos fenólicos) também foi contemplada neste estudo, em células vegetativas. A combinação de ácidos orgânicos e etanol resultou numa actuação sinergética, que provocou padrões de inibição de viabilidade celular similares aos do vinho. Os compostos fenólicos testados não causaram inactivação das células (nas concentrações utilizadas). Relativamente aos resultados obtidos em condições gástricas simuladas, em contexto de refeição simulada, podemos concluir que o consumo de vinho ao longo de uma refeição pode diminuir consideravelmente o número de células de B. cereus que poderá persistir no tracto gastrointestinal. O queijo fresco pasteurizado conferiu maior protecção às células do B. cereus, quando comparado com a matriz arroz com frango. Nesta investigação também foi avaliado o comportamento de esporos de B. cereus quando submetidos a condições gastrointestinais na presença e na ausência de vinho. A presença de vinho inibe a multiplicação das células resultantes da germinação de esporos no fluido intestinal sintético, dando origem a contagens totais (células vegetativas e esporos) de B. cereus mais baixas do que na ausência de vinho. Esta tese gerou resultados que indicam que o consumo de vinho durante uma refeição conduz à redução do número de células viáveis de B. cereus no tracto gastrointestinal, assim como à diminuição do impacto da eventual germinação de esporos que pode ocorrer no intestino, reduzindo, consequentemente, o risco de infecção que o referido patogénico pode causar.
- Detection of Pasteurellaceae in Laboratory Mice by Fecal PCRPublication . Ribeiro, Tânia Sofia Aguiar; Carvalho, Isabel Fidalgo; Mendes, Marta VazThe use of microbiologically defined laboratory animals in biomedical research has become standard practice in the last few decades. Microbiological standardization, based upon routine testing of the animals at regular intervals, has contributed to the 3Rs policy (Refinement, Reduction and Replacement). It allows the reduction of the number of animals used as it decreases the variation within and between test groups, and it plays an important role in the refinement of the overall health of laboratory animals thus improving their welfare. Additionally, it has reduced human health risks due to zoonotic diseases. Specific pathogen free (SPF) health status was developed to guarantee the absence of specific pathogens in laboratory animals whereas Specific Opportunistic and Pathogen-Free (SOPF) health status guarantees the absence of the major interfering opportunistic agents in addition to the specific pathogens. These negative definitions are based on a detailed exclusion list of agents which are likely to infect laboratory rodents and confound results from animal experiments, such as members of the Pasteurellaceae family. Among these, Pasteurella pneumotropica is considered to be the most frequently occurring opportunistic pathogen in laboratory rodents and it is usually isolated from the upper respiratory tract, lungs, genital and gastrointestinal tracts. The pathogenicity of this organism in immunocompetent laboratory mice and rats is regarded as low, but in immunodeficient animals it may lead to pneumonia, conjunctivitis, and respiratory and genital tract infections. However, due to the unsettled taxonomic structure of the Pasteurellaceae family and the occurrence of taxa other than Pasteurella pneumotropica, FELASA recommends the monitoring of SPF rodents for all Pasteurellaceae. The available diagnostic techniques for Pasteurellaceae screening traditionally include bacteriological methods, immunological and biochemical characterization. These procedures are time-consuming and sometimes yield indeterminate results due to the phenotypical diversity of this bacterial family. PCR assays based on the 16S rRNA gene sequence have recently been reported as alternatives to biochemical and culture methods for Pasteurellaceae detection. However, the protocols used are based on invasive sampling methods that require the sacrifice of animals. In this study we developed a simple, non invasive and specific PCR assay to detect Pasteurellaceae by using DNA isolated from mice feces. Furthermore we discuss the impact of this non-invasive technique in assessing the prevalence of Pasteurellaceae on laboratory rodents.
- Estudo das propriedades antioxidante e antimicrobiana de extractos de Mentha CervinaPublication . Rocha, Joana Sofia Martins da; Pintado, Manuela; Carvalho, Susana; Politi, Matteo; Castro, PaulaA Mentha cervina L. Opiz (Lamiaceae) é um tipo de menta que cresce selvagem nas margens dos rios nas regiões do noroeste da Península Ibérica. É uma planta aromática utilizada para fins culinários, especialmente para aromatizar pratos de peixe, e pelas suas propriedades medicinais em infusões com propriedades digestivas. O objectivo principal deste trabalho foi analisar a actividade antioxidante e antimicrobiana de extractos da Mentha cervina - aquosos, hidroetanólicos e óleo essencial -, de modo avaliar o seu potencial para o desenvolvimento de ingredientes funcionais para aplicação na indústria alimentar e cosmética. Os extractos obtidos das tinturas (misturas etanol/água) e das infusões foram caracterizadas quanto à actividade antioxidante pelo método de ABTS.+, ao teor de fenólicos totais pelo método de Folin-Ciocalteu e ao seu perfil de compostos fenólicos por LC-MS/MS. A actividade antioxidante do óleo essencial foi avaliada pelo método de TEAC. A actividade antimicrobiana do óleo foi avaliada pelo método de difusão em disco e CMI, sendo que esta, nas tinturas e infusões, foi avaliada pelo método de difusão em agar por poços. O potencial biológico de actividade antioxidante de todos os extractos foi avaliado pelo método de protecção do ADN da oxidação. Os extractos hidroetanólicos do caule a 65% de etanol e da folha a 40% de etanol apresentaram a maior actividade antioxidante na solução, mas quando avaliada com base no extracto seco foi o caule a 65 % de etanol que demonstrou a maior actividade. Em relação ao teor de fenólicos totais, o extracto das folhas a 65 % etanol evidenciou o maior teor na solução. No entanto, usando o extracto seco, para além das folhas, o caule a 65 % etanol apresentou também um elevado teor de compostos fenólicos. Todos os extractos, excepto o óleo essencial, protegeram o ADN da degradação por oxidação, porém os extractos hidroetanólicos demonstraram maior protecção. Os principais compostos fenólicos identificados por LC-MS/MS nos extractos aquosos e hidroetanólicos foram o ácido caféico e o ácido clorogénico. As tinturas e as infusões não inibiram o crescimento de qualquer dos microrganismos testados, contudo o óleo essencial foi capaz de inibir a E. coli, a Salmonella spp., o S. aureus, a Listeria innocua, o B. cereus, a Candida albicans e a Yarrowia lipolytica, com concentrações mínimas inibitórias diferenciadas para cada microrganismo testado. O óleo essencial da Mentha cervina demonstrou maior eficácia sobre as bactérias Gram negativas e as leveduras, o que se confirmou pela inibição total observada na sua curva de crescimento.
- Influence of walking speed in backpacker's gait : ground reaction forces and plantar pressure analysisPublication . Figueiredo, Maria Cristina Pinto Leite Braamcamp; Vilas-Boas, João PauloThe way we move can influence gait biomechanical parameters, and may, eventually, lead to damage and injury in short or long term. With this study we intended to, in first place, conduct a literature systematic review on the influence of speed in gait biomechanical parameters, and then investigate the effect of speed and backpack carrying on ground reaction force and plantar pressure parameters during gait. The first aim of this study was to systematically review the literature of the XXI century on the effect of increased speed on gait biomechanics. Three data base (PubMed, Science Direct and Scopus) were searched from 2001 to 2010 using the terms: (gait OR walking OR walk) AND (velocity OR speed) AND (ground reaction force OR kinetics OR kinematics OR biomechanical OR biomechanics OR plantar pressure OR mathematical model) AND (comparison OR compare OR change OR relation OR influence). A total of 71 papers were selected, dealing with analysis based on plantar pressure, kinetical, kinematical and electromyography variables. Results showed that there is a large consensus regarding the following biomechanical effects of gait speed increase: (i) time duration of stance; (ii) stride and step frequency; (iii) stride and step length; (iv) time duration of double support phase; (v) time duration of gait cycle; (vi) peak pressure; (vii) maximum force; (viii) vertical ground reaction force (GRF) peaks and intermediate minimum; (ix) time to vertical GRF peaks and intermediate minimum; (x) vertical impulse; (xi) anterior-posterior GRF peaks; (xii) anterior-posterior impulse; (xiii) peak moments; (xiv) peak powers; (xv) mechanical work; (xvi) centre of mass amplitudes; (xvii) muscle activity. However, the main aim of this study was to investigate the influence of the speed in ground reaction force and plantar pressure parameters during occasional overload gait, compared with the unloaded condition. Sixty participants with a mean age of 23.0 ± 3.7 years, mean height of 168.0 ± 0.1 cm and mean body mass of 67.8 ± 11.2 kg were enrolled in this study. The participants walked on a walkway at a slow (68 steps/s) and a fast (112 steps/s) speed with and without wearing a backpack which raise their ―total body mass index" to 30. Plantar pressure parameters were measured with an F-Scan insole pressure system and ground reaction forces were collected using a Bertec force plate. Results showed that there is an increase of both vertical and both anterior-posterior GRF peaks, while the intermediate minimum of the vertical GRF decreased during both conditions (with and without backpack). Hallux, lesser toes, lateral and central forefoot and medial and central rearfoot were the foot regions that presented an increase of peak pressure while speed increased, for both conditions. Stance phase duration decreases as speed increases, for both load conditions. Gait pattern seems to be influenced by occasional overload in plantar pressure parameters, double support and temporal gait events, like heel strike and toe off.
- Utilização do metilmetacrilato : risco de exposição ocupacionalPublication . Edra, Beatriz da Graça Nunes Veiga; Gutierres, ManuelO Metilmetacrilato (MMA) é a substancia base do cimento ósseo acrílico, cuja síntese química foi definida pela primeira vez em 1902, pelo químico alemão Röhm. Em 1943 foi estabelecido o protocolo para a produção química do cimento ósseo acrílico. No entanto, o grande impulso para a sua utilização na área da medicina, foi dado por Charnley, em 1958, aquando da sua utilização em artroplastias da anca. O cimento ósseo acrílico é um composto constituído essencialmente por um homopolimero de polimetilmetacrilato com um monómero de metilmetacrilato. Apesar de existirem diversas formas comerciais a sua fórmula química tem como substância de base o MMA associado a outro tipo de compostos, podendo variar em relação algum composto específica adequado a determinada situação clínica. Nas últimas décadas, e em consequência da sua ampla utilização, urge a necessidade de desenvolvimento das técnicas de cimentação nomeadamente em relação à preparação e aplicação do cimento ósseo acrílico, de forma a optimizar as suas propriedades e minimizar os riscos inerentes á sua utilização. Um foco importante no desenvolvimento dos sistemas de cimentação, foi controlar o nível de exposição ao MMA, de forma a criar um ambiente de trabalho seguro, pois apesar de não existir comprovação do seu possível potencial carcinogénico, diversos estudos comprovam a sua toxicidade principalmente no sistema pulmonar, hepático e cutâneo. Desta forma actualmente existem limites de exposição em relação à concentração e horas de exposição ao MMA, definidos pela IARC que, em colaboração com outras instituições, define também um conjunto de guidelines para uma prática correcta de manuseamento do cimento ósseo acrílico Este trabalho tem como objectivo analisar o risco de exposição ocupacional relacionado com a toxicidade do metilmetacrilato, em enfermeiros instrumentistas de dez hospitais da zona Norte, que na sua prática profissional utilizam o cimento ósseo diariamente. Esta investigação utilizou como instrumento de recolha de dados um questionário de forma a aferir informação relacionada com os níveis e horas de exposição, práticas de preparação, nível de conhecimento em relação às normas preconizadas para a sua utilização, manifestações fisiológicas aquando do seu manuseamento e controlo analítico realizado por parte destes profissionais de forma a despistar algum tipo de consequência inerente à exposição ao monómero de MMA. Os resultados evidenciaram que a maioria destes profissionais utilizam a técnica de preparação manual, sendo esta a que mais os expôem aos vapores de MMA, não tendo, na sua maioria, informação sobre as normas de utilização do cimento ósseo acrílico, Para além deste desconhecimento, os dados evidenciam a falta de recursos nas instituições, que lhes permita a utilização da técnica adequada de preparação de forma a diminuir o risco de exposição. Dos 143 enfermeiros inquiridos só 14% dos enfermeiros instrumentistas é que se expôem a um nível superior à concentração recomendada. Estas situações ocorrem quando os profissionais participam em mais de duas cirurgias por dia, com aplicação de cimento ósseo acrílico. No entanto, mais de metades dos inquiridos apresentam sintomas aquando do manuseamento do referido composto. Apesar de só 44 (23%) dos inquiridos realizarem em controlo analítico regular da função hepática e renal constatou-se que e destes, 14 apresentam alterações quer da função hepática e renal, sendo que este grupo é o que realiza maior número de cirurgias por dia e tem mais do que 13 anos de serviço. Conclui-se desta forma que, existe a necessidade de maior informação por parte destes profissionais de saúde em relação às normas preconizadas para o manuseamento do cimento ósseo acrílico, valores limite de exposição, além de sensibilização para um controlo analítico regular, de forma a minimizar o risco de exposição ocupacional.
- A percepção da segurança alimentar no contexto da restauraçãoPublication . Machado, Emílio Manuel Araújo; Teixeira, Paula Cristina Maia; Oliveira, Manuel Au-YongNuma sociedade cada vez mais exigente com os vectores da qualidade, a área alimentar não constitui excepção. Esses parâmetros inerentes à segurança alimentar tornam-se cada vez mais restritos e exigentes, formando balizas facilmente reconhecidas pelo consumidor em geral. Assim o presente estudo visa compreender como o consumidor português percepciona o actual estado da segurança alimentar em Portugal na restauração e quais os mecanismos ou atitudes que utiliza para se certificar, que está perante um alimento seguro. Neste contexto foi elaborado um inquérito disseminado on-line, através de consumidores com presença nas redes sociais e emitentes da sua percepção em perfis na área da restauração, com o intuito de aferir a percepção dos mesmos em relação ao consumo na restauração. Pela análise de 110 respostas válidas, verifica-se que o consumidor se sente confiante quando se desloca a um espaço de restauração, contudo a maioria dos consumidores reconhece o risco de intoxicação alimentar. Um factor a realçar neste estudo é que a segurança alimentar constitui um factor de escolha, superiorizando-se mesmo em relação ao preço. Averigua ainda a propensão do consumidor estar disposto a pagar um valor adicional para obter segurança num restaurante e como hierarquiza a segurança alimentar em relação a outros factores de atracção referentes a um determinado restaurante. Constata-se ainda uma amostra informada, capaz de classificar alimentos que possam ser susceptíveis de provocar intoxicações, mas que ainda demonstra dúvidas sobretudo em relação a critérios de conservação dos alimentos bem como à actuação das organizações institucionais de fiscalização preventiva.
- A planta medicinal Aloe Vera na indústria alimentarPublication . Manuel, Valentina Yolanda Lemos de Lucas; Hogg, TimA planta Aloe é uma erva importante vastamente utilizada na medicina tradicional. Entre estas, a Aloe vera é considerada a espécie biologicamente mais activa e é também a espécie mais comercializada. Vários estudos revelaram que os compostos das suas folhas possuem actividade terapeutica. Da folha desta planta são obtidos o látex e o gel. O látex conhecido pelas suas propriedades laxativas. O gel consiste em cerca de 99.5% de água, os restantes 0.5 – 1% de material sólido (vitaminas hidro e lipossolúveis, minerais, polissacáridos). Aos polissácaridos tem sido atribuída muita da sua actividade biológica. Contudo, os efeitos terapêuticos não tem sido bem correlacionados com cada componente individualmente. Na realidade, acredita-se que estas actividades biológicas devem ser atribuídas a acção sinergística dos compostos contidos neste em vez de uma única substância química. O processamento pode causar modificações irreversíveis as substâncias activas, o que pode promover alterações importantes nas propriedades fisiológicas e farmacológicas destes compostos. Foram revistos os métodos de processamento (secagem com ar quente, liofilização, processo de desidratação dessecante, processo de tempo, temperatura e higienização e desidratação osmótica) e sua influência nas propriedades do produto. A solução resultante do processamento da Aloe vera é incorporada com outras soluções ou agentes em produtos farmacêuticos, cosméticos ou alimentares. O processamento do gel tornou-se uma grande indústria em todo o mundo devido a sua aplicação na indústria alimentar onde pode ser utilizado como matéria-prima ou ingridiente principal na elaboração de alimentos funcionais. Outra vertente da utilização de plantas medicinais, incluindo a A. vera, é como fonte natural de aditivos alimentares e na indústria suplementos alimentares. Existe actualmente no mercado português uma grande variedade de suplementos alimentares contendo a Aloe vera. A legislação permite que os produtos derivados de ervas possam ser comercializados na Europa tanto como produtos medicinais como produtos alimentares. A certificação deve ser uma aposta dos produtores e das empresas. Essa medida pode aumentar a confiança do consumidor. As empresas devem, também, colaborar com os organismos estatais no fornecimento de dados que permitam um estudo mais profundo sobre a planta e os beneficios da sua utilização e a regulação do mercado de produtos derivados.
- The characterization of the possible interaction between the Chlamydia effector tarp and its outative chaperone CT043Publication . Pedrosa, António José Santos Tedim Sousa; Carabeo, ReyChlamydia trachomatis is the most common cause of sexually transmitted bacterial infection in Europe and in the United States. It is a Gram negative obligate intracellular pathogen with a unique biphasic development cycle, possessing two distinct morphological forms, the elementary body (EB) and the reticulate body (RB). The EBs are the infectious form and are able to attach and invade mammalian cells. This process is likely dependent on the Type III Secretion System, which allows secretion of Chlamydia effectors that modulate the actin skeleton of the host cell and promote invasion. One of the first effectors to be secreted is TarP (Translocated Actin Recruiting Protein). Orthologs of this effector are present in all Chlamydia with some polymorphisms associated with some subdomains. An example is the tyrosine rich domain, which is only present in the TarP homolog of the C. trachomatis species. Despite this difference, all chlamydial TarP are able to recruit and nucleate actin to promote the internalisation of Chlamydia. Since early secretion of TarP is crucial for invasion it was hypothesized that this secretion, in order to be efficient must be facilitated by a Type III Secretion chaperone. These usually are small proteins (13-16 kDa) with an acidic pI and a secondary structure motif of α-β-β-β-α-β-β. Three putative Chlamydia trachomatis Type III secretion chaperones, CT043 (Slc1), CT663 (Slc2), CT088 (Scc1), which are present in EBs have been predicted by their secondary structures. The interaction of these chaperones with the N-terminal domain of TarP (amino acids 1-200) was tested using pull-down assays. A specific interaction between TarP and Slc1 was observed, but not with Slc2 or Scc1. Using a bacterial two-hybrid assay, we evaluated the effects of mutating TarP(1-100) on its interaction with Slc1. The objective was to identify critical amino acid residues involved in chaperone binding. Using several mutants TarP derivatives, we were able to conclude that the interaction between TarP and Slc1 may depend of both specific amino acids and hydrophobic interactions.
- Presença de microrganismos em óleos de corte e sua relação com a saúde ocupacionalPublication . Carvalho, Mariana Augusta Neves da Silva; Castro, Paula Lima; Nogueira, José Manuel RochaOs colaboradores de empresas do sector metalúrgico e metalomecânico utilizam óleos de corte, ou fluidos de corte durante o processo produtivo, com o objectivo de facilitar a operação de corte. Estes óleos oferecem perigosidade à saúde humana e ao meio ambiente. A contaminação microbiológica, nomeadamente por bactérias e fungos, nos óleos emulsionados é uma preocupação constante, pois estas podem provocar problemas na saúde dos colaboradores, incluindo dermatoses. O enfraquecimento das unhas constitui um sinal/sintoma deste problema. Neste contexto, e uma vez que são escassos os dados referentes a infecções fúngicas superficiais em colaboradores das metalomecânicas em Portugal, são necessários estudos que permitam determinar a sua prevalência e relação com a utilização de óleos de corte. No período compreendido entre 02 de Agosto de 2007 e 09 de Novembro de 2007 efectuaramse colheitas de pele e/ou de unhas em duas populações diferentes de metalomecânicas (A e B) e dos diferentes óleos contidos nas máquinas das metalomecânicas e utilizados pelos colaboradores. Posteriormente, efectuaram-se análises laboratoriais micológicas nos Laboratórios da ESB. Do total de óleos (n = 17), houve confirmação de presença de fungos (culturas positivas) em 14 culturas (82%), sendo 9 óleos da Indústria Metalomecânica A (82%) e 5 (80%) da Metalomecânica B. Em 3 meios (18%) as culturas foram negativas. Desses, 2 (18%) pertenciam à Metalomecânica A e 1 (20%) pertencia à Metalomecânica B. Do total de indivíduos (n = 205), houve confirmação micológica de dermatomicoses (culturas positivas) em 176 culturas (86%). Em 29 casos (14%) os resultados foram negativos. De um total de 175 indivíduos com culturas positivas, 61 (35%) apresentam sinal de dermatoses – só culturas positivas. Os fungos mais frequentes nos óleos de corte foram também os mais frequentes nas unhas: Rhodotorula mucilaginosa e Pichia guilliermondii. Não foi possível avaliar com exactidão se a exposição a óleos de corte provoca a ocorrência de dermatoses.