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Abstract(s)
Introduction: Bone regeneration involves osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts, playing a vital role in healing processes. Saliva, a non-invasive sample for PCR, contains biomarkers for monitoring bone turnover markers (BTM), making it a valuable tool for enhancing diagnosis and treatment in periodontics through non-invasive analysis. Goal: This thesis aims to detect and quantify osteogenic biomarkers in vitro, creating a monitoring panel to validate these biomarkers as reliable indicators of bone remodelling, with the intent to apply this approach to saliva samples. Materials and Methods: Study Design: Ethical approval was granted in October 2023, the longitudinal study collects data at 0, 3, and 6 months with informed consent. Inclusion Criteria: Participants include those aged 18+ from the post-graduation course of Implantology at the Faculty of Dental Medicine, Universidade Católica Portuguesa, needing grafts or substitute treatments as identified by orthopantomography. Data collection involved the analysis of orthopantomographic images, administration of questionnaires, and saliva sampling using the passive drooling technique. The relative expression levels of OPG, RANK, RANKL, and GAPDH in MC3T3 cells, treated for 7 days with OSSIX® Plus Ossifying Collagen Barrier Membrane, were quantified using the commercial kit NZYSpeedy qPCR Green Master Mix 2x (MB22401), from NZYtech. Additionally, the expression levels of Alpl, Runx2, Col1a1, and Bglap genes were quantified in untreated MC3T3 cells. Results: The study involved 11 patients (6 females, 5 males) average age 51.82 years), revealing reduced radiolucency at treatment sites, indicating bone regeneration. RT-PCR assays from MC3T3 treated cells with collagen membranes confirmed overexpression of OPG, RANK, RANKL genes, while differential expression of GAPDH was not detected. In vitro gene expression conditions for Alpl, Runx2, Col1a1, and Bglap were optimized in untreated MC3T3 cells. Conclusion: These findings indicate that these genes could serve as salivary biomarkers for non-invasive bone regeneration, warranting further research.
Introdução: A regeneração óssea, envolve osteoblastos, osteócitos e osteoclastos e desempenha um papel vital nos processos de cura. A saliva, uma amostra não invasiva para RT-PCR, contém biomarcadores para monitorização de marcadores de remodelação óssea, tornando-a numa ferramenta valiosa para melhorar o diagnóstico e tratamento em periodontologia, através de análises não invasivas. Objetivo: Detetar e quantificar biomarcadores osteogénicos in vitro, para criar um painel de monitorização e validar estes biomarcadores como indicadores fiáveis de remodelação óssea, com o intuito de aplicar esta abordagem a amostras de saliva. Materiais e métodos: O estudo longitudinal, com aprovação ética em outubro de 2023, envolveu a recolha de dados aos 0, 3 e 6 meses, com participantes com 18+ anos do curso de pós-graduação em Implantologia da Universidade Católica Portuguesa, necessitando de enxertos ou tratamentos substitutivos identificados por ortopantomografia. A recolha de dados inclui a análise de imagens ortopantomográficas, questionários e recolha de saliva utilizando a técnica de gotejamento passivo. A análise da expressão génica envolveu a quantificação de OPG, RANK, RANKL e GAPDH em células MC3T3 tratadas com a Membrana de Barreira de Colagénio Ossificante OSSIX® Plus usando o o kit comercial NZYSpeedy qPCR Green Master Mix 2x (MB22401), da NZYtech. Adicionalmente, os níveis de expressão de Alpl, Runx2, Col1a1 e Bglap foram quantificados em células MC3T3 não tratadas. Resultados: O estudo envolveu 11 pacientes (6 mulheres, 5 homens, idade média 51,82 anos), revelando radiolucência reduzida nos locais de tratamento, indicando regeneração óssea. Os ensaios de RT-PCR confirmaram a sobrexpressão de OPG, RANK e RANKL em células MC3T3 tratadas, sem deteção de expressão diferencial de GAPDH. As condições de expressão génica in vitro para Alpl, Runx2, Col1a1 e Bglap foram otimizadas em células MC3T3 não tratadas. Conclusões: Estes resultados sugerem o potencial desses genes como biomarcadores salivares para monitorização não invasiva da regeneração óssea, justificando mais pesquisas.
Introdução: A regeneração óssea, envolve osteoblastos, osteócitos e osteoclastos e desempenha um papel vital nos processos de cura. A saliva, uma amostra não invasiva para RT-PCR, contém biomarcadores para monitorização de marcadores de remodelação óssea, tornando-a numa ferramenta valiosa para melhorar o diagnóstico e tratamento em periodontologia, através de análises não invasivas. Objetivo: Detetar e quantificar biomarcadores osteogénicos in vitro, para criar um painel de monitorização e validar estes biomarcadores como indicadores fiáveis de remodelação óssea, com o intuito de aplicar esta abordagem a amostras de saliva. Materiais e métodos: O estudo longitudinal, com aprovação ética em outubro de 2023, envolveu a recolha de dados aos 0, 3 e 6 meses, com participantes com 18+ anos do curso de pós-graduação em Implantologia da Universidade Católica Portuguesa, necessitando de enxertos ou tratamentos substitutivos identificados por ortopantomografia. A recolha de dados inclui a análise de imagens ortopantomográficas, questionários e recolha de saliva utilizando a técnica de gotejamento passivo. A análise da expressão génica envolveu a quantificação de OPG, RANK, RANKL e GAPDH em células MC3T3 tratadas com a Membrana de Barreira de Colagénio Ossificante OSSIX® Plus usando o o kit comercial NZYSpeedy qPCR Green Master Mix 2x (MB22401), da NZYtech. Adicionalmente, os níveis de expressão de Alpl, Runx2, Col1a1 e Bglap foram quantificados em células MC3T3 não tratadas. Resultados: O estudo envolveu 11 pacientes (6 mulheres, 5 homens, idade média 51,82 anos), revelando radiolucência reduzida nos locais de tratamento, indicando regeneração óssea. Os ensaios de RT-PCR confirmaram a sobrexpressão de OPG, RANK e RANKL em células MC3T3 tratadas, sem deteção de expressão diferencial de GAPDH. As condições de expressão génica in vitro para Alpl, Runx2, Col1a1 e Bglap foram otimizadas em células MC3T3 não tratadas. Conclusões: Estes resultados sugerem o potencial desses genes como biomarcadores salivares para monitorização não invasiva da regeneração óssea, justificando mais pesquisas.
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Keywords
Bone regeneration Bone grafts RT-PCR Gene expression Regeneração óssea Enxertos ósseos Periodontal Expressão génica