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Browsing Faculdade de Direito by Field of Science and Technology (FOS) "Ciências Naturais::Ciências Biológicas"
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- Determinação da concentração mínima inibitória aos carbapenemos por citometria de fluxoPublication . Gomes, Maria do Rosário Almeida; Vaz, Cidalia Irene Azevedo PinaEntre os beta-lactâmicos, os carbapenemos são os antimicrobianos mais eficazes contra bactérias Gram-negativo. O aparecimento de bactérias multirresistentes ameaça seriamente essa classe de fármacos que salvam vidas. A determinação de concentrações mínimas inibitórias (CMI) aos antibióticos é atualmente considerada importante quer para o tratamento destas infeções quer para o controlo epidemiológico. Este estudo propõe um novo teste de suscetibilidade antimicrobiana baseado em citometria de fluxo para determinação rápida da CMI aos carbapenemos diretamente de hemoculturas positivas. Noventa e sete isolados clínicos de bacilos de Gram-negativo e oito estirpes de referência (ATCC), incluindo 36 Enterobacteriaceae, 36 Pseudomonas aeruginosa e 33 Acinetobacter spp., foram estudados. As hemoculturas (BD) foram inoculados com 103 bactérias/frasco e 8 mL de sangue fresco humano de dador saudável, e incubadas até positivarem. As células foram recuperadas do sangue de acordo com um protocolo previamente otimizado, incubadas durante 1 h a 37 °C, com concentrações variando entre 1 e 8 μg/mL de imipenem (IMI) e 1 e 8 μg/mL de meropenemo (MRP), e um corante fluorescente indicador do potencial de membrana celular. As células foram analisadas num citómetro de fluxo BD Accuri™C6 Plus. Para cada concentração foi calculado um índice de fluorescência (SI), que é tanto maior quanto maior for a lesão celular, e a menor concentração de fármaco que levou ao aumento da fluorescência (CFM: menor concentração do fármaco que produz um aumento do SI) foi estimada. A associação entre valores de CMI e dados citometricos foi realizada usando um modelo linear geral multivariado. O modelo estatístico estimou os valores de corte e o respetivo intervalo de confiança para a avaliação da CFM para meropenem e imipenem. A análise dos dados mostrou uma associação significativa entre a CMI dos valores de MRP e IMI e CFM com uma elevada concordância (93,06% e 96,70%). A menor concentração de fármaco que causou aumento da fluorescência, determinada por citometria de fluxo, é uma excelente abordagem para calcular os valores de CMI para carbapenemos, mostrando uma alta concordância com a metodologia clássica. Este valor foi obtido em cerca de 2 horas o que, comparando com o método padrão que demora 48h, se traduz num significativo progresso.
- The potential role of legumes and inoculants in sustainable farming systemsPublication . Barros, Marta Isabel Cardoso; Vasconcelos, Marta Wilton Pereira Leite de; Iannetta, PietroO estudo de técnicas agrícolas sustentáveis tornou-se fundamental face ao aumento da população e ao crescente desgaste dos recursos naturais. Assim, esta tese visa a integração de leguminosas num contexto de agricultura sustentável a nível europeu, utilizando para tal uma série de estudos de caso nos quais o papel da ervilha, da soja e da fava foi avaliado. O primeiro estudo de caso analisou culturas intercalares de cevada e ervilha e de que forma estas últimas podem afetar a nutrição da cevada, bem como que consequência traz a limitação de ferro (Fe) no caso da ervilha. Na cevada, destaca-se o aumento significativo (p<0.05) da concentração de Fe, magnésio (Mg), fósforo (P), cálcio (Ca) e zinco (Zn), quando intercalada com ervilha. Posteriormente, a limitação de Fe induzida durante o crescimento hidropónico da ervilha gerou o aumento (p<0.05) da concentração de Fe ao nível da parte aérea da planta enquanto que a concentração de Fe (p<0.0001), boro (B) (p<0.01) e Mg (p<0.05) diminuiu ao nível da raíz. Nas mesmas condições de limitação, a expressão da enzima Fe redutase foi de 0.022 μmol Fe/g FW-1 h-1, diminuindo 67% relativamente a uma situação de administração normal de Fe (100 μM Fe3+-EDDHA). Mais ainda, o gene nitrito redutase 1 (NIR1) aumentou (p<0.05) a sua expressão ao nível da raíz e da parte aérea da planta em situação de carência. O segundo estudo permitiu a análise do conteúdo mineral de favas previamente selecionadas pela sua maior percentagem de azoto (N), tendo em conta propriedades morfológicas do grão e parâmetros de rendimento. As variedades de fava com teor de N mais elevadas não foram indicativas de um perfil mineral melhorado e apresentaram-se heterogéneas dentro da mesma variedade. O terceiro incluiu a caraterização de estirpes de bactérias presentes em três inóculos comerciais destinados à produção de soja (Euralis, LegTech, RhizLiq), bem como avaliou o impacto da sua aplicação. A identificação molecular das estirpes Bradyrhizobium japonicum e Bradyrhizobium diazoefficiens nos inóculos testados mostrou que a sua dupla combinação com micorriza arbuscular é a mais eficaz para a maximização dos efeitos da inoculação na soja. Por último, o quarto estudo compreendeu a análise quantitativa da produção de hormona vegetal ácido 3-índole-acético (IAA) por parte de isolados de Rhizobium leguminosarum bv. viciae, relacionando a referida produção com a biomassa da ervilha de onde surgiram os isolados. Foi ainda efetuada uma análise qualitativa em placa da solubilização de fosfato nas mesmas amostras. As análises funcionais de rhizobia de ervilha demonstraram uma relação não significativa (R2=0,1324) entre a produção de hormona vegetal e a biomassa de cada uma das amostras, assim como também não ocorreu solubilização de fosfato na maioria dos casos. Globalmente, estes estudos contribuem para o desenvolvimento da literatura científica nesta área, confirmando o papel das leguminosas em técnicas agrícolas sustentáveis de melhoria da qualidade nutricional e agronómica das culturas.